Amidase (AMD)
Enzymen:Enzymen zijn macromoleculaire biologische katalysatoren; de meeste enzymen zijn eiwitten.
Amidase:Amidasen katalyseren de hydrolyse van diverse endogene en vreemde alifatische en aromatische amiden door een acylgroep over te dragen aan water, waarbij vrije zuren en ammoniak ontstaan. Hydroxamzuren en andere organische zuren worden veel gebruikt als geneesmiddelen omdat ze bestanddelen zijn van groeifactoren, antibiotica en tumorremmers. Amidasen kunnen worden onderverdeeld in R-type en S-type acylasen, afhankelijk van de stereoselectiviteit van de katalysator.
Naast het katalyseren van de hydrolyse van amiden, kan amidase ook acyltransferreacties katalyseren in aanwezigheid van co-substraten zoals hydroxylamine.
Amidases met verschillende bronnen hebben een verschillende substraatspecificiteit; sommige kunnen alleen aromatische amiden hydrolyseren, andere alleen alifatische amiden, en weer andere hydrolyseren α- of ω-aminoamiden. De meeste aminen vertonen alleen een goede katalytische activiteit voor acyclische of eenvoudige aromatische amiden, maar voor complexe aromatische en heterocyclische amiden, met name amiden met ortho-substituenten, is de activiteit over het algemeen laag (slechts enkele enzymen vertonen een beter katalytisch effect).
Katalytisch mechanisme:
| Enzymen | Productcode | Productcode |
| Enzympoeder | ES-AMD-101~ ES-AMD-119 | een set van 19 amidasen, 50 mg per stuk 19 stuks * 50 mg / stuk, of een andere hoeveelheid |
| Screeningkit (SynKit) | ES-AMD-1900 | een set van 19 amidasen, 1 mg per stuk 19 stuks * 1 mg / stuk |
★ Hoge substraatspecificiteit.
★ Sterke chirale selectiviteit.
★ Hoge conversie-efficiëntie.
★ Minder bijproducten.
★ Milde reactieomstandigheden.
★ Milieuvriendelijk.
➢ Enzymscreening moet worden uitgevoerd voor specifieke substraten vanwege de substraatspecificiteit, om zo een enzym te vinden dat het beoogde substraat met het beste katalytische effect katalyseert.
➢ Vermijd contact met extreme omstandigheden zoals: hoge temperaturen, hoge/lage pH-waarden en organische oplosmiddelen met een hoge concentratie.
➢ Normaal gesproken moet het reactiesysteem een substraat en een bufferoplossing bevatten (de optimale pH-waarde voor de enzymreactie). Co-substraten zoals hydroxylamine moeten aanwezig zijn in het acyltransferreactiesysteem.
➢ AMD moet als laatste aan het reactiesysteem worden toegevoegd, bij optimale pH-waarde en temperatuur.
➢ Alle soorten AMD hebben verschillende optimale reactieomstandigheden, dus elk type moet afzonderlijk verder worden onderzocht.
Voorbeeld 1(1):
Hydrolyseactiviteit ten opzichte van verschillende amide-substraten
| Substraat | Specifieke activiteit μmol min-1mg-1 | Substraat | Specifieke activiteit μmol min-1mg-1 |
| Acetamide | 3.8 | ο-OH benzamide | 1.4 |
| Propionamide | 3.9 | p-OH benzamide | 1.2 |
| Lactamide | 12.8 | ο-NH2benzamide | 1.0 |
| Butyramide | 11.9 | p-NH2benzamide | 0,8 |
| Isobutyramide | 26.2 | ο-Toluamide | 0,3 |
| Pentanamide | 22.0 | p-Toluamide | 8.1 |
| Hexanamide | 6.4 | Nicotinamide | 1.7 |
| Cyclohexanamide | 19.5 | Isoricotinamide | 1.8 |
| Acrylamide | 10.2 | Picolinamide | 2.1 |
| Metacrylamide | 3.5 | 3-fenylpropionamide | 7.6 |
| Prolinamide | 3.4 | Indol-3-acetamide | 1.9 |
| Benzamide | 6.8 |
De reactie werd uitgevoerd in een 50 mM natriumfosfaatbufferoplossing met een pH van 7,5 bij 70 ℃.
| Amiden | Hydroxylamine | Hydrazine |
| Acetamide | 8.4 | 1.4 |
| Propionamide | 18.4 | 3.0 |
| Isobutyramide | 25.0 | 22.7 |
| Benzamide | 9.2 | 6.1 |
De reactie werd uitgevoerd in een 50 mM natriumfosfaatbufferoplossing met een pH van 7,5 bij 70 ℃.
Verwante reagensconcentraties: amiden, 100 mM (benzamide, 10 mM); hydroxylamine en hydrazine, 400 mM; enzym 0,9 μM.
Voorbeeld 2(2):
Voorbeeld 3(3):
1. D'Abusco AS, Ammendola S., et al. Extremofielen, 2001, 5:183-192.
2. Guo FM, Wu JP, Yang LR, et al. Process Biochemistry, 2015, 50(8): 1400-1404.
3. Zheng RC, Jin JQ, Wu ZM, et al. Bioorganische chemie, 2017, online beschikbaar 7.
